利用CHO(dhfr-)细胞高效表达GM-CSF/Fcγ2-融合蛋白

目的利用二氢叶酸还原酶缺陷型细胞CHO(dhfr-)高效表达融合蛋白GM-CSF/Fcγ2-.方法利用脂质体基因转染技术,把含有融合基因GM-CSF/Fcγ2-的真核表达质粒pRc/CMV2/GM-CSF/Fcγ2-和含有二氢叶酸还原酶基因的真核表达质粒pSV2-dhfr共转染二氢叶酸还原酶缺陷型细胞CHO(dhfr-)中.用G418和撤除H、T(次黄嘌呤、胸腺嘧啶核苷)双筛选,获得dhfr+neo+双表型阳性的细胞克隆.取表达产量最高的克隆进行亚克隆,并行MTX加压筛选,以提高表达量.用RT-PCR、ELISA和Western blot对表达产物进行鉴定并行MTT法检测表达蛋白的生物学活性.结果成功地表达出了具有GM-CSF生物学活性的融合蛋白GM-CSF/Fcγ2-.结论该方法可行,表达量达到15μg/ml.