一种改良大鼠海马神经元原代培养的方法

目的 为缺血性脑损伤模型的制备及研究建立一种更好的体外培养海马神经元的方法.方法 实验组取出生24 h内的Wistar新生鼠海马,用木瓜酶和DNA酶消化,以1×108/L的密度接种于含体积分数0.20胎牛血清的DMEM-F12培养液中,24 h后更换无血清培养液,每隔3d半量换液.对照组采用传统的培养方法培养细胞.培养期间用倒置显微镜观察细胞形态及数量变化.采用免疫荧光法测定神经元特异性烯醇化酶表达,判断海马神经元培养是否成功.结果实验组的海马神经元培养12h,可见大部分细胞贴壁;培养24 h,大部分细胞可见3～4个突起,突起长度为(25.0±2.5)μm;培养3d,神经元胞体增大,可见明显光晕;之后神经元分化逐渐成熟,胞体透亮,呈锥形或多极形,光晕明显,神经元之间的突起联系更加紧密,形成密集的神经细胞网络;培养13 d后,神经元细胞开始退化、变性,胞体萎缩,神经细胞网络开始老化.随着培养天数的增加,神经元可出现少量凋亡,但实验组培养1、3、5、8d时的神经元数量明显高于对照组(t=11.5～49.5,P＜0.05).免疫荧光法鉴定显示,实验组神经元细胞阳性率为(93.53±1.67)％.结论用上述改良方法培养得到的海马神经元细胞生长状态良好,可用于后续实验研究.