Ca2+对小鼠骨髓基质干细胞定向分化为肝细胞的作用

目的 研究小鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)向肝细胞定向分化过程中Ca’的变化,探讨BMSCs向肝细胞定向分化的机制.方法 无菌分离小鼠骨髓,贴壁法纯化和扩增BMSCs.分别添加肝组织提取液、β-神经生长因子(β-NGF)、β-NGF+尼莫地乎诱导BMSCs向肝细胞分化,对照组添加等量营养液.光镜下观察分化细胞的形态;免疫细胞化学染色法检测分化细胞的肝细胞特异性标志物α1抗胰蛋白酶(AAT)和清蛋白(ALB)的表达;吲哚靛青绿(ICG)摄取实验鉴定分化细胞的转运功能;流式细胞技术对比检测肝样分化细胞内游离Ca2+的含量;MTT法检测钙离子拮抗剂尼莫地平对干细胞增殖和定向分化能力的影响.结果 肝组织提取液和β-NGF诱导后,分化细胞逐渐变圆、呈肝前体细胞特定形态;分化细胞摄取ICG,呈绿色;分化细胞呈AAT和ALB阳性表达;肝组织提取液组和β-NGF组比较差异无显著意义.β-NGF诱导形成的肝样分化细胞Ga2含量显著高于对照组细胞(f =8.757,P＜0.01).尼莫地平可以阻断BMSCs向肝细胞的诱导分化,抑制干细胞的增殖.结论 Ca2对BMSCs的增殖和向肝细胞定向分化具有重要的作用.