离心速率对大鼠心肌细胞线粒体提取质量的影响

①目的 探讨不同提取方案对心肌细胞线粒体质量的影响.②方法 在体外用Langendorff法灌注雄性Wistar大鼠心脏,取左心室组织并分离线粒体;Western blot法检测确定分离线粒体的纯度,透射电子显微镜(scanning electron microscopy,SEM)检测分离线粒体的结构形态,线粒体呼吸控制率(respiratory control ratio,RCR)测定分离线粒体的功能.③结果 当分离转速为3500g时,与12000g相比,分离得到的线粒体Tubulin蛋白和COXⅣ蛋白表达均较低,表明低转速能够提高分离线粒体的纯度.与此结果一致,电镜结果显示与3500g组相比,12000g组可见较多微丝微管结构及线粒体内外膜分离.与12000g组相比,3500g组Ⅲ态呼吸及RCR值明显增高,表明低转速分离获得的线粒体呼吸功能增强.④结论 低转速不仅可以提高分离线粒体的纯度,而且有利于维持分离线粒体的正常结构和功能.