人pEGFP-C1-IL-8真核表达载体的构建与表达

[目的]构建人pEGFP-Cl-IL-8真核表达载体,为研究白介素8(interleukin-8,IL-8)在卵巢癌及其他肿瘤中的作用奠定基础.[方法]PCR法扩增IL-8全基因序列后,将其克隆人含增强型绿色荧光蛋白(enhenced green fluorescent protein,EGFP)表达载体pEGFP-C1,通过菌落PCR鉴定、双酶切鉴定及测序鉴定后,将构建好的表达载体与其空载体分别转染至人卵巢癌细胞系A2780中,荧光显微镜下观察转染效率,用RT-PCR和ELISA法检测细胞转染后细胞IL-8的表达水平.[结果]经过菌落PCR鉴定、双酶切鉴定及测序鉴定,重组人IL-8真核表达载体构建正确.pEGFP-C1-IL-8和pEGFP-C1分别转染入A2780细胞后,转染成功的细胞能够表达GFP,转染效率约为75％～80％.转染空载体的A2780细胞未检测到IL-8 mRNA表达,而转染重建载体的A2780细胞表达水平较高,细胞上清液IL-8蛋白表达水平约为前者的2.91倍(P＜0.05).[结论]成功构建了真核表达载体 pEGFP-Cl-IL-8,重组质粒能使人卵巢癌细胞系A2780过表达IL-8.