金黄色葡萄球菌血浆凝固酶克隆、表达、纯化及其生物活性研究

[目的]克隆表达金黄色葡萄球菌血浆凝固酶,获取重组血浆凝固酶并分析其生物学活性,探讨其在口腔术后止血方面的应用前景.[方法]提取金黄色葡萄球菌基因组,以此为模板,利用PCR技术扩增出编码血浆凝固酶(coagulase,Coa)的基因,通过分子生物学方法构建表达带有his标签血浆凝固酶的pET21a(+)-hiS-coagulase重组质粒.经PCR分析、酶切分析和测序鉴定后,转化至大肠杆菌BL21内.经IPTG诱导表达目的蛋白,采用SDS-PAGE法分析重组蛋白的表达水平情况并经his柱纯化,获取血浆凝固酶重组蛋白,测定其对兔血浆及人血浆的凝固作用.[结果]PCR结果和酶切分析显示,得到了 2 100 bp左右的核酸片段,与his-coagulase片段大小一致,测序结果也与预先设计序列一致;重组质粒经诱导表达后获得相对分子质量为 78 × 103左右蛋白条带,纯化目的蛋白经测定具有促兔血浆及人血浆凝固活性.[结论]本研究成功构建了表达血浆凝固酶的重组质粒,获得了相应的工程菌株,以及具有促凝活性的重组血浆凝固酶,为口腔手术术后止血提供了新的方向.