端粒酶逆转录酶基因hTERT突变表达载体在膀胱癌细胞T24中的表达
JOURNAL OF THE FOURTH MILITARY MEDICAL UNIVERSITY（2002）
Abstract
目的构建端粒酶逆转录酶基因(hTERT)缺失突变的真核表达载体pEGFP-hTERT,并转入膀胱癌细胞株T24中,观察其稳定表达. 探讨其对端粒酶活性调控机制及成为膀胱肿瘤基因治疗新靶点的可能性. 方法将PCR扩增的hTERT缺失突变体片段用 EcoRI与SalI酶切,并连接到真核表达载体pEGFP-C1上, 构建成hTERT缺失突变的真核表达载体pEGFP-hTERT;利用DNA-磷酸钙共沉淀法将pEGFP-hTERT导入膀胱癌细胞株T24中,应用荧光显微镜、与衰老相关的β-半乳糖苷酶染色等方法观察转染细胞中hTERT-GFP融合蛋白定位表达及对膀胱癌细胞生长的影响. 结果酶切鉴定证实hTERT缺失突变体已克隆到pEGFP-C1的EcoRI与SalI位点之间,在转染细胞中观察到与其融合的绿色荧光蛋白的稳定表达,定位于细胞核内;转染细胞2 wk后与衰老相关β-半乳糖苷酶表达增加,细胞生长受抑制. 结论构建的端粒酶逆转录酶基因hTERT缺失突变真核表达载体pEG FP-hTERT可在膀胱癌细胞T24中稳定表达. 突变型hTERT蛋白可入细胞核中竞争性影响端粒酶的功能,进而抑制膀胱癌细胞的生长.
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mutant htert,carcinoma,recombinant vector,bladder
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