GP73调控PI3K/Akt通路介导肝癌细胞索拉非尼耐药机制的实验研究

目的 研究高尔基体糖蛋白73(Golgi protein 73,GP73)与PI3K/Akt信号通路在肝癌细胞索拉非尼耐药中的作用机制.方法 MTT法检测索拉非尼对肝癌细胞活性的抑制率,采用浓度递增法对肝癌HepG2亲本细胞进行长时间培养,建立索拉非尼耐药细胞株模型,倒置显微镜观察细胞形态变化.应用质粒转染技术对耐药细胞HepG2进行GP73过表达和敲低干预,观察GP73的不同表达水平对索拉非尼敏感性的影响.Western blot法检测亲本细胞和耐药细胞中GP73、EMT标记蛋白及PI3K/Akt信号通路的蛋白表达.结果 不同浓度索拉非尼对肝癌细胞Bel-7404、SK-Hep-1及HepG2的活性均有抑制作用.长期低浓度索拉非尼刺激HepG2细胞形态向长梭形改变.GP73过表达减弱了肝癌细胞对索拉非尼的敏感性;GP73敲低增加其敏感性.HepG2耐药细胞中GP73、N-cadherin及Vi-mentin蛋白表达上调,E-cadherin水平下调(均P＜0.05).此外,HepG2耐药细胞中GP73、PI3K及p-Akt蛋白表达增加.结论 GP73表达上调及PI3K/Akt通路激活,促进EMT可能是肝癌索拉非尼的耐药机制.