靶向IGF-1R的siRNA增强肺癌细胞对Trail诱导凋亡敏感性的研究

目的 研究IGF-1R特异RNA干扰后肺腺癌细胞A549增殖和凋亡的改变以及其对Trail的敏感性.方法 化学合成IGF-1R特异siRNA转录模板,与表达载体连接,转染大肠杆菌扩增后提取质粒,酶切鉴定和DNA测序分析.转染A549细胞后筛选稳定表达IGF-1R-siRNA细胞株,FQ RT-PCR、Western blot和免疫组织化学检测IGF-1R基因表达.MTT法和流式细胞仪测定Trail作用前后转染和非转染A549细胞增殖活性和凋亡率.结果 成功构建IGF-1 R-siRNA表达载体并筛选出稳定表达IGF-1R-siRNA单克隆细胞.和空白对照相比IGF-1R蛋白和IGF-1RmRNA表达分别下降79.01％ (0.17 ±0.06 vs.0.81 ±0.15) (P ＜0.01)和76.05％(1.36±0.26vs.5.68 ±0.45) (P＜0.01).免疫组织化学显示IGF-1R表达降低.Trail作用于IGF-1R-siRNA的A549,细胞增殖速度降低(P＜0.05);凋亡率明显增加(P＜0.01).结论 IGF-1R-siRNA表达载体具有RNA干扰作用.IGF-1R表达下降后A549细胞增殖速度减慢,对Trail诱导的细胞凋亡敏感性增加.