基于TLR4/MyD88/NF-κB通路探讨乌司他丁 减轻脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤的作用

目的:观察乌司他丁对脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠保护作用及对TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响.方法:将48只12～15周龄的SPF级Wistar雄性大鼠随机分为4组,模型组尾部静脉注射0.5mL的脂多糖(LPS)(5mg/kg)构建急性肺损伤(ALI)模型,对照组给予等体积的生理盐水,地塞米松(DXM)干预组和乌司他丁(UTI)干预组则在LPS注射前24h和10min时分别给予腹腔注射1mL的地塞米松(2mg/kg)和1mLUTI溶液(5mg/kg)进行预处理,对照组和模型组则给予等体积的生理盐水代替.计算10h大鼠体重下降比值和肺组织湿干重比(W/D),采用伊文斯兰方法检测肺血管内皮通透性,苏木精-伊红染色法(HE)染色观察大鼠肺部组织病变,并进行评分,ELISA法检测支气管灌洗液(BALF)中TNF-α、IL-6和IL-1β因子水平,同时显微镜下观察并统计总细胞和嗜中性粒细胞的个数,蛋白免疫印迹检测TLR4/MyD88/NF-κB信号通路中的TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达.结果:和对照组相比,模型组,DXM干预组和UTI干预组大鼠体重明显下降(P<0.05),和模型组相比,DXM干预组和UTI干预组大鼠体重明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05).和对照组相比,模型组大鼠在受到LPS刺激后,W/D比值出现明显升高(P<0.05);与模型组相比,DXM干预组和UTI干预组W/D比值比例明显下降(P<0.05).和对照组相比,模型组BALF中的嗜中性粒细胞和总细胞数量出现明显的增加(P<0.05);和模型组相比,DXM组和UTI组BALF中的嗜中性粒细胞和总细胞数量出现明显的下降(P<0.05).对照组肺组织结构完整,无充血,肺泡腔清晰,间隔内未发现水肿和炎性细胞浸润.和对照组相比,模型组的肺泡腔明显变小,间隔出现增厚,肺泡壁出现充血水肿,且发现了大量的炎性细胞浸润,HE评分明显高于对照组(P<0.05).而DXM组、UTI组和模型组相比,肺组织结构接近于正常,炎性细胞浸润得到缓解,DXM组和UTI组HE评分明显低于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05).和对照组相比,模型组大鼠伊文斯兰浓度出现明显的升高(P<0.05),和模型组相比,DXM组和UTI组大鼠伊文斯兰浓度出现明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05).和对照组相比,模型组中IL-1β、IL-6和TNF-α水平出现明显的升高(P<0.05);与模型组相比,DXM组和UTI组大鼠BALF中IL-1β、IL-6和TNF-α水平出现明显的下降,差异具有统计学意义(P<0.05).和对照组相比,模型组中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达明显升高(P<0.05);和模型组相比,DXM组和UTI组大鼠肺组织中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达明显下降,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:乌司他丁可以抑制LPS所致的TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的激活,从而减轻炎症反应,发挥对LPS致肺损伤的保护作用.