耳蜗螺旋动脉上连接蛋白43与老年性耳聋的关系研究

背景 老年性耳聋是指随着年龄的增长而缓慢出现听力阈值增加的疾病,耳蜗螺旋动脉(SMA)在维持耳蜗血供和听力方面发挥重要的作用.连接蛋白43(Cx43)在血管壁上广泛表达,对血管的舒缩功能有着重要的影响,但Cx43在SMA上的表达与老年性耳聋的关系尚不清楚.目的 以D-半乳糖(D-gal)诱导的老年性耳聋豚鼠为研究对象,研究SMA上Cx43与老年性耳聋的关系.方法 2018年5月,将无耳疾3月龄SPF级豚鼠36只随机分为Control组、NS组、D-gal组,各12只.D-gal组在正常饲养的基础上,颈背部皮下注射D-gal 500 mg·kg-1·d-1;NS组在正常饲养的基础上,颈背部皮下注射0.9％氯化钠溶液(体积等同D-gal组);对照组正常饲养,不做任何处理;共6周.取Control组豚鼠交配产下的3只新生豚鼠,处死分离SMA,贴壁法培养原代SMA血管平滑肌细胞(VSMCs),鉴定后取第3代SMA VSMCs制备细胞衰老模型:对照组为正常培养48 h;衰老组为在正常培养基础上加入30 g/L D-gal培养48 h;AAP10组为在正常培养的基础上加入100 nmol/L AAP10预处理,而后加入30 g/L D-gal培养48 h.采用Morris水迷宫测试实验检测Control组、NS组、D-gal组豚鼠测试第1、2、3、4、5天逃避潜伏期及第6天穿越平台的次数;比较Control组、NS组、D-gal组豚鼠听性脑干反应(ABR)阈值,肝组织、脑组织、血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)水平,SMA上Cx43 mRNA及Cx43表达水平.比较对照组、衰老组、AAP10组VSMCs内SOD活性、MDA水平,VSMCs中Cx43表达水平.结果 组别与时间在豚鼠逃避潜伏期中存在交互作用(F交互=6.99,P交互<0.05);组别与时间在豚鼠逃避潜伏期中主效应显著(F组间=53.43,F时间=38.15;P组间<0.05,P时间<0.05).D-gal组豚鼠测试第3、4、5天逃避潜伏期长于Control组和NS组(P<0.05);D-gal组豚鼠测试第6天穿越平台次数少于Control组和NS组(P<0.05).D-gal组豚鼠ABR阈值高于Control组和NS组,肝组织、脑组织、血清SOD活性低于Control组和NS组,肝组织、脑组织、血清MDA水平高于Control组和NS组(P<0.01).衰老组VSMCs内SOD活性低于对照组和AAP10组,MDA水平高于对照组和AAP10组(P<0.01);AAP10组VSMCs内SOD活性低于对照组,MDA水平高于对照组(P<0.01).D-gal组豚鼠SMA上Cx43 mRNA及Cx43表达水平低于Control组和NS组(P<0.01).衰老组VSMCs中Cx43表达水平低于对照组和AAP10组(P<0.05);AAP10组VSMCs中Cx43表达水平低于对照组(P<0.05).结论 D-gal致衰老情况下豚鼠SMA上Cx43表达水平的变化可能与老年性耳聋有关,为临床后续的研究方向奠定了基础.