Rad对心肌营养素1诱导心肌细胞肥大作用的实验研究
wf(2016)
Abstract
目的:探讨小G蛋白Rad对心肌营养素1(CT-1)诱导心肌细胞肥大作用的影响。方法2011年6月—2013年3月,选取新生健康雄性SD乳鼠60只。构建载有Rad基因的腺病毒载体( Ad-Rad)、含有编码绿色荧光蛋白基因的空白腺病毒载体( Ad-GFP)。取乳鼠心脏并剪碎,进行心肌细胞原代培养。采用随机数字表法将提取的原代心肌细胞平均分为6组,即空白对照组〔转染磷酸盐缓冲液( PBS),刺激物为PBS〕、 Ad-GFP组(转染Ad-GFP,刺激物为PBS)、 Ad-Rad组(转染Ad-Rad,刺激物为PBS)、 CT-1对照组(转染PBS,刺激物为CT-1)、 Ad-GFP+CT-1组(转染Ad-GFP,刺激物为CT-1)、 Ad-Rad+CT-1组(转染Ad-Rad,刺激物为CT-1)。转染腺病毒载体48 h后,采用流式细胞仪检测腺病毒载体转染率,并采用反转录-聚合酶链式反应( RT-PCR)法检测Rad、心房钠因子( ANF)、β肌球蛋白重链(β-MHC) mRNA表达水平, Western blotting法检测Rad表达水平。结果腺病毒载体转染率为95.51%。Ad-Rad组Rad mRNA 表达水平高于空白对照组、 Ad-GFP组、 CT-1对照组、 Ad-GFP +CT-1组( P <0.05); Ad-Rad+CT-1组Rad mRNA表达水平高于空白对照组、 Ad-GFP组、 CT-1对照组、 Ad-GFP+CT-1组( P<0.05)。 CT-1对照组、Ad-GFP+CT-1组ANF mRNA 表达水平高于空白对照组、 Ad-GFP组、 Ad-Rad组( P <0.05); Ad-Rad +CT-1组 ANF mRNA表达水平低于空白对照组、 Ad-GFP组、 Ad-Rad组、 CT-1对照组、 Ad-GFP+CT-1组( P<0.05)。 CT-1对照组、Ad-GFP+CT-1组β-MHC mRNA表达水平高于空白对照组、 Ad-GFP组、 Ad-Rad组(P<0.05); Ad-Rad+CT-1组β-MHC mRNA表达水平低于CT-1对照组、 Ad-GFP+CT-1组( P<0.05)。 Ad-Rad组Rad表达水平高于空白对照组、 Ad-GFP组、CT-1对照组、 Ad-GFP+CT-1组( P<0.05); Ad-Rad+CT-1组Rad表达水平高于空白对照组、 Ad-GFP组、 CT-1对照组、Ad-GFP+CT-1组( P<0.05)。结论 Rad具有负性调节CT-1诱导心肌细胞肥大的作用。
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