Rad对心肌营养素1诱导心肌细胞肥大作用的实验研究

目的：探讨小G蛋白Rad对心肌营养素1（CT-1）诱导心肌细胞肥大作用的影响。方法2011年6月—2013年3月，选取新生健康雄性SD乳鼠60只。构建载有Rad基因的腺病毒载体（ Ad-Rad）、含有编码绿色荧光蛋白基因的空白腺病毒载体（ Ad-GFP）。取乳鼠心脏并剪碎，进行心肌细胞原代培养。采用随机数字表法将提取的原代心肌细胞平均分为6组，即空白对照组〔转染磷酸盐缓冲液（ PBS），刺激物为PBS〕、 Ad-GFP组（转染Ad-GFP，刺激物为PBS）、 Ad-Rad组（转染Ad-Rad，刺激物为PBS）、 CT-1对照组（转染PBS，刺激物为CT-1）、 Ad-GFP＋CT-1组（转染Ad-GFP，刺激物为CT-1）、 Ad-Rad＋CT-1组（转染Ad-Rad，刺激物为CT-1）。转染腺病毒载体48 h后，采用流式细胞仪检测腺病毒载体转染率，并采用反转录－聚合酶链式反应（ RT-PCR）法检测Rad、心房钠因子（ ANF）、β肌球蛋白重链（β-MHC） mRNA表达水平， Western blotting法检测Rad表达水平。结果腺病毒载体转染率为95.51％。Ad-Rad组Rad mRNA 表达水平高于空白对照组、 Ad-GFP组、 CT-1对照组、 Ad-GFP ＋CT-1组（ P ＜0.05）； Ad-Rad＋CT-1组Rad mRNA表达水平高于空白对照组、 Ad-GFP组、 CT-1对照组、 Ad-GFP＋CT-1组（ P＜0.05）。 CT-1对照组、Ad-GFP＋CT-1组ANF mRNA 表达水平高于空白对照组、 Ad-GFP组、 Ad-Rad组（ P ＜0.05）； Ad-Rad ＋CT-1组 ANF mRNA表达水平低于空白对照组、 Ad-GFP组、 Ad-Rad组、 CT-1对照组、 Ad-GFP＋CT-1组（ P＜0.05）。 CT-1对照组、Ad-GFP＋CT-1组β-MHC mRNA表达水平高于空白对照组、 Ad-GFP组、 Ad-Rad组（P＜0.05）； Ad-Rad＋CT-1组β-MHC mRNA表达水平低于CT-1对照组、 Ad-GFP＋CT-1组（ P＜0.05）。 Ad-Rad组Rad表达水平高于空白对照组、 Ad-GFP组、CT-1对照组、 Ad-GFP＋CT-1组（ P＜0.05）； Ad-Rad＋CT-1组Rad表达水平高于空白对照组、 Ad-GFP组、 CT-1对照组、Ad-GFP＋CT-1组（ P＜0.05）。结论 Rad具有负性调节CT-1诱导心肌细胞肥大的作用。