微小 RNA -150对鼻咽癌细胞放疗抵抗的影响研究

目的：探讨微小 RNA（miR）-150对于鼻咽癌细胞放疗抵抗的影响，并分析其机制。方法2014年1月—2015年6月，建立放疗抵抗的鼻咽癌细胞株 CNE -2R。取 CNE -2和 CNE -2R，通过克隆形成实验计算不同放疗剂量下（0、3、6 Gy）的克隆形成率（PE）、细胞存活率，采用 MTS 法检测照射1、2、3、4、5 d 时的细胞增殖活性，实时定量荧光聚合酶链式反应（ Real - time PCR）法检测miR-150、糖原合成酶激酶3β（ GSK3β） mRNA 水平， Western blotting 法检测 GSK3β水平。将 CNE -2随机分为 miR-150模拟物组（转染 miR-150模拟物）、微小 RNAs （miRs）无关序列组（转染 miRs 无关序列），通过荧光素酶报告载体实验检测荧光素酶活性。结果0 Gy 放疗剂量时， CNE -2与 CNE -2R 的 PE、细胞存活率比较，差异无统计学意义（P >0.05）；3 Gy、6 Gy 放疗剂量时，CNE -2R 的PE、细胞存活率高于 CNE -2（P <0.05）。照射1~5 d 时，CNE -2R 的细胞增殖活性高于 CNE -2（P <0.05）。CNE-2R 中miR-150水平高于 CNE -2，GSK3β mRNA 水平低于 CNE -2（P <0.05）。CNE -2R 中 GSK3β水平低于 CNE -2（P <0.05）。转染 GSK3β野生型质粒后，miR-150模拟物组荧光素酶活性低于 miRs 无关序列组（ P <0.05）；转染GSK3β突变型质粒后，miRs 无关序列组与miR-150模拟物组荧光素酶活性比较，差异无统计学意义（P >0.05）。结论miR-150参与了鼻咽癌细胞的放疗抵抗，GSK3β是miR-150的直接靶基因，miR-150- GSK3β轴可能成为一种新的用于合理治疗鼻咽癌的策略。