建立β3肾上腺素能受体过表达的心肌成纤维细胞模型方法的比较

目的：用两种不同的方法构建β3肾上腺素能受体（β3-AR）过表达的 SD 乳鼠心肌成纤维细胞（CFBs）模型，并对两种方法的效果进行比较，为今后在细胞水平观察β3-AR 对心功能，尤其是对慢性心力衰竭（CHF）的影响提供新的实验方法。方法2015年3—6月，选取出生1~3 d 的 SFP 级 SD 乳鼠8只。分离 SD 乳鼠CFBs 并体外培养，随机分为3个感染复数（MOI）组，分别为 MOI 50组、MOI 100组、MOI 200组，采用β3-AR 基因过表达的慢病毒载体感染 CFBs，利用流式细胞仪检测感染率，确定最佳 MOI。将 SD 乳鼠 CFBs 随机分为4个β3-AR 激动剂干预组，分别为正常对照组、10-6 mol/ L 组、10-5 mol/ L 组、10-4 mol/ L 组，采用不同浓度β3-AR 激动剂干预CFBs，利用 Western blotting 法检测β3-AR 表达水平，挑选出β3-AR 激动剂干预 CFBs 的最适浓度。结果普通光学显微镜下观察 CFBs，无搏动性，大多数呈梭形，其细胞核较大，胞质透明。倒置荧光显微镜下观察感染24、48、72、96 h 时 CFBs 状态及荧光表达情况，感染72 h 时，各 MOI 组 CFBs 生长状态较好，细胞大多数呈梭形，无搏动性，细胞核较大，且肉眼观察荧光表达最佳。MOI 100组、MOI 200组感染率高于 MOI 50组（P ＜0.05）；MOI 200组感染率低于MOI 100组（P ＜0.05）。10-6 mol/ L 组、10-5 mol/ L 组、10-4 mol/ L 组β3-AR 表达水平高于正常对照组（ P ＜0.05）；10-5 mol/ L组β3-AR 表达水平高于10-6 mol/ L 组、10-4 mol/ L 组（P ＜0.05）。10-5 mol/ L 组、MOI 100组β3-AR 表达水平高于正常对照组（P ＜0.05）；MOI 100组β3-AR 表达水平高于10-5 mol/ L 组（P ＜0.05）。结论使用β3-AR 过表达的慢病毒载体感染 CFBs 与β3-AR 激动剂干预 CFBs 均可使其β3-AR 过表达，且前者效果优于后者。