RNA 干扰作用于 HIV -1vpr 基因的筛选实验研究
Chinese General Practice(2015)
摘要
目的:筛选鉴定针对 HlV -1vpr 基因的小干扰 RNA(siRNA)片段。方法根据 siRNA 设计要求合成siRNA56、siRNA160和 siRNA185寡核苷酸片段,分别转染至含 HIV -1vpr 质粒的 HEK 293T 细胞,并进行总 RNA 提取,采用 Real - time PCR 和 Western blotting 分别从核酸和蛋白水平对 HIV -1vpr 基因表达水平进行验证。结果siRNAs 成功转染含 HIV -1vpr 质粒的 HEK 293T 细胞,降低了 HIV -1vpr 基因的表达水平,其中在 RNA 水平 siRNA160组干扰抑制作用最强,抑制率为89%;在蛋白水平 siRNA56组干扰抑制作用最强,抑制率为96%。结论3个基因片段的 siRNA 均可以下调 HIV -1vpr 的表达水平,但存在差异性,为探索 HIV/ AIDS 基因治疗的可行性和高效性提供了可靠的实验依据。
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