鞘氨醇激酶1调控沉默信息调节因子1表达的研究

目的 探讨鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase1,SPK1)与沉默信息调节因子1(silent mating type informa-tion regulation 2 homolog 1,SIRT1)表达的关系.方法 用病毒感染复数(MOI)=20 pLKO.1-shSPK1-GFP干涉慢病毒(shSPK1组)及pPIG-U6-Scramble-GFP对照慢病毒(GFP-SC组)感染人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothe-lial cells,HUVECs),48 h后提取细胞RNA及蛋白,实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白免疫印迹(Western Blot)测定SIRT1基因及蛋白表达水平.用MOI=20 pHIV7-U6-shSIRT1-RFP干涉慢病毒(shSIRT1组)及pHIV7-U6-Scramble-RFP对照慢病毒(RFP-SC组)感染HUVECs,48 h后提取细胞RNA并用RT-PCR检测细胞SPK1基因表达水平.用100 nmol 1-磷酸鞘氨醇(S1P)处理HUVECs,分别在0.5、2、24及36 h提取细胞RNA,24、48及72 h提取细胞蛋白,检测SIRT1基因及蛋白表达水平.用100 nmol S1P处理干涉过SIRT1的HUVECs检测细胞的增殖、迁移及体外管状结构形成能力.结果 shSPK1组SIRT1基因和蛋白表达水平低于GFP-SC组(P＜0.01).shSIRT1组SPK1基因表达水平与RFP-SC组比较差异无统计学意义(P＞0.05).100 nmol S1P处理HUVECs不同时间SIRT1基因及蛋白表达水平高于未处理组,HUVECs增殖能力高于shSIRT1组(P ＜0.05,P＜0.01).shSIRT1组HUVECs迁移率低于RFP-SC组,S1P处理组高于RFP-SC、shSIRT1组(P＜0.05).shSIRT1组HUVECs体外管状结构形成能力低于RFP-SC组,S1P处理组高于shSIRT1组(P＜0.05).结论 SPK1可以正向调控SIRT1表达并对HUVECs功能产生影响.