大鼠颅骨成骨细胞和骨细胞的分离纯化与比较研究

目的：探讨大鼠颅骨中骨细胞和成骨细胞的分离纯化方法,并分别比较细胞形态、碱性磷酸酶( alkaline phosphatase, ALP)活性和成骨特异性蛋白的表达情况。方法分别采用序列酶消化和EDTA螯合法,从SPF级新生SD大鼠的颅骨中分离培养骨细胞和成骨细胞,对其进行HE染色、Ⅰ型胶原免疫组化染色、骨钙素( BGP)免疫荧光染色；采用偶氮偶合法对两种细胞ALP进行染色,并检测其活性；应用蛋白质印迹( Western blot)检测两种细胞的Ⅰ型胶原和BGP的表达量。结果细胞形态学观察及HE染色表明,骨细胞多呈星状或树枝状且有较多突触,而成骨细胞呈长梭形且突触较少；Ⅰ型胶原免疫组化染色与Western blot结果表明,Ⅰ型胶原在成骨细胞中表达量较高,呈棕黄色,骨细胞中表达量较低；而BGP免疫荧光染色与Western blot显示,成骨细胞中BGP表达较低,而在骨细胞中表达较高,细胞荧光染色与HE染色结果相似；ALP染色结果表明,ALP在成骨细胞中表达较高,骨细胞中表达较低；ALP活性检测与ALP染色结果相似。结论采用序列酶消化及EDTA螯合法,可以从大鼠颅骨中分离得到较纯的骨细胞及成骨细胞,利用HE染色、免疫组化、免疫荧光染色、Western blot等技术,可以对骨细胞和成骨细胞进行分离纯化与研究。