钙整合素结合蛋白1慢病毒干扰载体的构建及表达

目的：构建人钙整合素结合蛋白1(calcium- and integrin-binding protein 1, CIB1)基因 RNA 干扰慢病毒载体,获得稳定下调 CIB1表达的慢病毒。方法根据 CIB1的序列,设计 siRNA 序列,克隆入慢病毒核心质粒 pGV112中,并与辅助质粒一起转染293T 细胞进行病毒包装,用慢病毒感染293T 细胞并测定病毒滴度。以 CIB1干扰慢病毒感染人胶质瘤细胞 SHG44后,应用 Western blotting 方法检测 CIB1的表达。结果成功构建 CIB1干扰慢病毒载体,包装后获得慢病毒颗粒,病毒滴度检测可达6×108 pfu/ ml,感染细胞 CIB1蛋白表达水平显著下调(P <0.01)。结论成功构建人CIB1 基因RNA 干扰慢病毒,为后续CIB1 生物学功能研究奠定基础。