条件性胰岛β细胞DEPTOR基因敲除小鼠构建及鉴定

目的 构建并鉴定条件性胰岛β细胞DEPTOR基因敲除小鼠,为研究DEPTOR基因在糖尿病发生机制的研究提供动物模型.方法 将引进的条件性胰岛β细胞特异性表达Cre重组酶小鼠与DEPTORloxp/loxp小鼠进行杂交繁殖,并对子代进行基因型鉴定,获得基因型为DEPTORloxp/-Cre+/-的小鼠;再让DEPTORloxp/-Cre+/-的小鼠与DEPTORloxp/loxp小鼠杂交获得DEPTORloxp/loxpCre+/-小鼠;基因型为DEPTORloxp/loxpCre+/-的小鼠即为本实验所需要构建模型小鼠.3周龄时通过PCR法鉴定小鼠的基因型;8周龄时腹腔注射他莫昔芬诱导Cre重组酶表达后,免疫荧光验证DEPTOR基因敲除效果.结果 从引进这两种小鼠开始繁殖10个月,共获得基因型为DEPTORloxp/loxpCre+/-的小鼠10只,PCR结果证实小鼠的基因型符合DEPTORloxp/loxp-Cre+/-.免疫荧光结果提示敲除效果明显.结论 利用Cre/loxp系统,本研究成功构建并鉴定了条件性胰岛β细胞DEPTOR基因敲除小鼠,为在动物水平研究DEPTOR基因在糖尿病发病机制中的作用提供研究平台.