pET32a-PTEN融合质粒的构建与表达

目的：构建PTEN原核融合质粒，利用原核表达体系表达PTEN蛋白。方法：从人新鲜外周血中提取总RNA，采用逆转录和聚合酶链反应等分子生物学技术扩增PTEN编码区基因，并将其pET32a质粒融合，化学法转化大肠杆菌DH5α进行克隆。将鉴定正确的pET32a-PTEN融合质粒转化入表达菌株BL21，通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导其蛋白表达，SDS-PAGE和Western-Blot鉴定蛋白表达情况。结果：菌落PCR及DNA测序证实目的基因与质粒完整融合；融合质粒成功转入表达菌株BL21（DE3），SDS-PAGE和Western-Blot结果显示表达菌经IPTG诱导后表达出73 kDa左右的蛋白。结论：成功构建融合质粒，并且PTEN全长蛋白在原核表达菌BL21中完整、高效表达。