耐药结核分枝杆菌多重Taqman-MGB探针检测方法的建立

目的 建立耐药结核分枝杆菌的多重Taqman-MGB探针检测体系.方法 针对结核分枝杆菌抗结核一线药物突变位点[利福平: RpoB(526)/(531);乙胺丁醇: embB(306);异烟肼: KatG(315)、inhA(-15);链霉素: Rpsl(43)]设计并合成引物探针;构建耐药结核分枝杆菌野生型和突变型模板,对其进行梯度稀释;配制结核分枝杆菌耐药基因检测试剂,用不同类型模板进行检测;检测72例结核样本(耐利福平20株,耐异烟肼22株,耐链霉素1株,耐多药17株),并与罗氏药效试验结果比较.结果 该检测体系可同时检测6个结核突变位点,最低检测限为104拷贝/mL,对临床样本检测其总符合率为100％,一致性好(χ2=137.3,P＜0.001).结论 本研究建立了耐药结核分枝杆菌的快速检测方法,可较好应用于卫生检疫系统和临床实验室.