siR N A 干扰 A T1 R 基因调控链脲佐菌素诱导NIT －1细胞凋亡的实验研究

目的：用siRNA干扰技术沉默小鼠胰岛素瘤NIT－1细胞血管紧张素Ⅱ1型受体（ AT1R）基因，探讨其对链脲佐菌素（STZ）诱导的胰岛素瘤细胞凋亡的影响。方法针对小鼠AT1R基因，设计并合成3对siRNA序列，脂质体法转染至NIT－1细胞，荧光显微镜观察荧光强度检测转染效率，Real－time PCR检测AT1R mRNA表达量判断不同干扰序列及干扰时间的基因沉默效果；分4组：空白组不予任何干预，STZ组予5 mmoL／L STZ干预30 min，si－AT1R组予40 nmol／L si－AT1R转染24 h，si－AT1R＋STZ组予40 nmoL／L si－AT1R转染24 h后5 mmoL／L STZ干预30 min；Real－time PCR检测Caspase－3 mRNA表达量，Hoechst33342染色荧光显微镜和Annex-in V－FITC／PI流式细胞术检测细胞凋亡率。结果40 nmol／L siRNA转染的荧光强度最强，转染后AT1R mRNA表达量明显下降，si－AT1R－2转染24 h的沉默效果最佳（92.20％）；Caspase－3 mRNA表达量：STZ组与空白组比增加了2.37倍（P＜0.05），si－AT1R＋STZ组与STZ组比减少了11.28％，但差异无统计学意义；细胞凋亡率：STZ组与空白组比增加了3.27倍（P＜0.05），si－AT1R＋STZ组与STZ组比减少了26.82％（P＜0.05）。结论本研究建立了稳定的胰岛细胞AT1R基因沉默模型；RNA干扰沉默胰岛细胞AT1R基因可通过下调Caspase－3 mRNA表达量降低STZ诱导的细胞凋亡率，提示AT1R介导了STZ诱导的胰岛细胞凋亡过程。