携带NT-3和BDNF基因重组慢病毒载体的构建及在脊髓损伤中的意义

目的 构建携带神经营养素3(NT-3)和脑源性神经营养因子(BDNF)基因的重组慢病毒载体及探讨其在脊髓损伤中的意义.方法 利用PCR方法获取NT-3和BDNF基因,将所得目的基因与慢病毒载体(p+LV-CMV-EF1a-green和pLV-CMV-EF1a-RFP)分别进行双切酶后定向重组和连接,其产物转化细菌感受态细胞后,对阳性克隆进行测序和分析比对.质粒载体构建成功后,利用病毒包装体系,转入293T细胞,获得的重组慢病毒液,采用孔稀释法测定病毒滴度.结果 成功获得携带NT-3和BDNF基因的重组慢病毒载体,二者滴度分别为3×107 TU/ml和2×107 TU/ml.结论 成功获得携带NT-3和BDNF基因的重组慢病载体,为后续实验运用重组慢病载体共转染脂肪干细胞奠定基础,进而为治疗脊髓损伤提供给了新思维.