Hsa_circ_0004674通过miR-1254调控EGFR对骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响研究

目的 探讨环形RNA(circRNA)检测hsa_circ_0004674通过微RNA-1254(miR-1254)调控表皮生长因子受体(EGFR)对骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响.方法 通过微阵列分析筛选MG63细胞中差异表达的circRNA,实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测hsa_circ_0004674在骨肉瘤细胞MG63和正常成骨细胞NHOst中的表达情况,分析hsa_circ_0004674对MG63细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响;miRanda预测hsa_circ_0004674和miR-1254之间的结合位点,双荧光素酶报告基因检测hsa_circ_0004674与miR-1254的相互作用,分析hsa_circ_0004674作为miR-1254的海绵对MG63细胞增殖、侵袭与迁移的影响;TargetScan预测miR-1254和EGFR之间的结合位点,双荧光素酶报告基因检测miR-1254与EGFR的相互作用,分析EGFR对MG 63细胞增殖、侵袭与迁移的影响.细胞增殖、侵袭和迁移能力分别用细胞克隆形成实验、细胞侵袭实验和细胞划痕实验检测.CCK-8法检测过表达EGFR对MG63细胞活力的影响,Western blot法检测hsa_circ_0004674和miR-1254对EGFR表达的影响及过表达EGFR对MG63细胞中Bax、Bcl-2表达的影响.结果 与NHOst细胞比较,MG63细胞中hsa_circ_0004674的表达水平上调(P<0.01),miR-1254的表达水平下调(P<0.01),EGFR mRNA表达水平上调(P<0.01),干扰hsa_circ_0004674或EGFR表达可使MG63细胞增殖、侵袭与迁移受抑制.miR-1254过表达也可抑制MG63细胞增殖、侵袭与迁移,而干扰miR-1254表达可促进MG63细胞增殖、侵袭与迁移;与仅干扰miR-1254表达比较,同时干扰hsa_circ_0004674和miR-1254的表达后,hsa_circ_0004674表达的下调能部分逆转miR-1254表达下调对细胞功能的影响.hsa_circ_00046743'UTR与miR-1254特异性结合,调控miR-1254的表达活性.miR-1254与EGFR 3'UTR特异性结合,调控EGFR的表达.miR-1254过表达降低MG63细胞的活力,EGFR过表达增加MG63细胞的活力.miR-1254过表达促进MG63细胞中Bax的表达,抑制Bcl-2的表达,而EGFR过表达抑制了MG63细胞中Bax的表达,促进Bcl-2的表达.结论 hsa_circ_0004674通过miR-1254调控EGFR表达,从而调控骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭.