转染正常c-CBL基因后耐药GIST体外药物敏感实验研究

目的 研究转染正常c-CBL基因后耐药胃肠道间质瘤(GIST)细胞在体外对甲磺酸伊马替尼作用的影响.方法 选择的瘤源细胞来自1例29岁青年男性患者,诊断为小肠间质瘤复发伴腹腔转移.通过细胞爬片、Western blot、RT-PCR检测基因鉴定细胞.通过将携带正常c-CBL基因的反转录病毒载体转染耐药GIST细胞中,四唑盐比色法(MTT)测定转染前后耐药GIST细胞对甲磺酸伊马替尼药物敏感性.结果 Western Blot检测培养耐药GIST的C-kit稳定表达C-kit蛋白,基因测序显示耐药GIST细胞C-kit突变位点位于第9号外显子,通过检测显示培养耐药GIST保持了原有的生物学特性.甲磺酸伊马替尼对GIST细胞作用72 h MTT实验结果显示:转染前耐药细胞在1.6 μmol/L浓度时,抑制率未超过50％;然而转然后,在0.10μmol/L浓度抑制率达到76.5％,最佳浓度为0.10～0.20 μmol/L,转柒前后不同浓度的抑制率差异有统计学意义(P＜0.01).结论 通过转染正常c-CBL至耐药GIST细胞,增强了对甲磺酸伊马替尼的敏感性.