过敏毒素C3a在健康人气道上皮间质转化中的作用研究

目的 观察过敏毒素C3a在正常人气道上皮间质转化(EMT)中的作用及其相关分子机制.方法 培养正常人气道上皮细胞BEAS-2B,分为对照组,重组人(rhC3a)刺激组,rhC3a+C3a受体拮抗剂(C3aRA)的拮抗组,通过显微镜观察细胞形态学变化情况;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力;ELISA检测细胞上清液中转化生长因子-β1(TGF-β1)的蛋白表达情况;RT-PCR检测C3a受体(C3aR)和EMT相关指标mRNA变化情况;Western blot检测C3aR、Smad2/3、p38-MAPK蛋白表达情况.结果 30、50 nmol/L rhC3a刺激组细胞形态由正常鹅卵石样变为梭形,加入1μmol/L C3aRA拮抗组细胞形态较对照组比较无明显改变.50 nmol/L rhC3a刺激组的细胞增殖较对照组降低(P=0.047);30 nmol/L rhC3a刺激组中TGF-β1蛋白水平较对照组升高(P＜0.05),C3aR mRNA及蛋白水平较对照组均升高(P＜0.05),p-Smad2/3、p-p38-MAPK蛋白水平较对照组升高(P＜0.05),加入1 μmol/L C3aRA可以降低以上指标表达(P＜0.05).30 nmol/L rhC3a刺激组中α-平滑肌肌动蛋白、N-钙黏蛋白mRNA表达上调,E钙黏蛋白mRNA表达下降,加入1μmol/L C3aRA可以拮抗这一过程(P＜0.05).结论 过敏毒素C3a通过结合C3aR,诱导正常人气道上皮细胞发生EMT,其机制可能是通过激活Smad2/3、p38-MAPK通路来参与.