携带小鼠信号转导子及转录激活子3重组慢病毒载体的构建与鉴定

目的：构建携带小鼠信号转导子及转录激活子3(STAT3)的重组慢病毒载体,并检测 STAT3的蛋白表达,进行慢病毒包装并鉴定。方法将小鼠成肌细胞总 RNA 通过 STAT3引物逆转录为 cDNA PCR 扩增、回收后,同 pLVX-IRES-Zs-Green1载体片段连接,酶切鉴定及测序,将 pLVX-IRES-ZsGreen1-STAT3转染293 T 细胞,48 h 后收集细胞,Western blot 检测STAT3表达量,通过瞬时转染法包装出病毒上清。结果测序结果证实 STAT3成功插入 pLVX-IRES-ZsGreen1慢病毒载体,成功构建了慢病毒载体 pLVX-IRES-ZsGreen1-STAT3,共转染293 T 细胞48 h,Western blot 检测 STAT3表达量明显增强。测定病毒滴度为8.4×107 TU/mL。结论成功构建了 STAT3基因的重组慢病毒表达载体,为进一步应用奠定了基础。