巢氏PCR检测血片中低密度间日疟原虫的研究

目的 探讨巢式PCR应用于检测低密度疟原虫血片DNA的方法.方法 以健康人抗凝血为稀释液提取不同浓度梯度间日疟原虫血片DNA,测定其最低检出限,将一份含有高密度间日疟原虫的抗凝血样按照1∶10、1∶100、1∶1000、1∶2000、1∶4000、1∶8000、1∶16000、1∶32000比例进行稀释,制成9个浓度梯度血样.每个浓度血样按照厚血膜5ul、薄血膜2ul同时制作2张血片,连续稀释(9个稀释度)一份含有高密度间日疟原虫的EDTA抗凝血样本,制作标准血片,同时进行所制得的血片中厚、薄血膜通过显微镜计数后,分别用以提取DNA,进行和巢式PCR检测.结果 间日疟原虫血片厚血膜的检出限为1∶16000(0.8个虫/μl血),薄血膜检出限为1∶100,与镜下计数水平一致.结论 巢式PCR适用于低密度血片中间日疟原虫DNA的检测,具有较高的检测意义.