小鼠心肌微血管内皮细胞的原代培养及鉴定

目的 建立一种小鼠心肌微血管内皮细胞体外培养体系.方法 无菌环境下取出3～4周大小的C 57小鼠心脏,并去除左右心房、瓣膜组织和结缔组织,将余下的心肌组织用70％的酒精浸泡15s,PBS清洗干净后滴加少量胎牛血清并尽量剪碎心肌组织,将剪碎后的组织块均匀接种到1％明胶包被的6孔板内,内皮细胞专用培养基培养,倒置显微镜观察细胞生长形态,vWF相关抗原进行免疫荧光鉴定.结果 贴壁后的组织块于24小时左右开始长出细胞,大约1周后细胞汇合呈铺路石样.传代后小鼠心肌微血管内皮细胞的生长曲线近似“S”形,第1、2天生长速度缓慢,第3、4天生长速度增快,进入指数增生期,第5～7天时达到汇合状态,呈铺路石样.免疫荧光鉴定vWF相关抗原阳性表达,并且分离得到的小鼠心肌微血管内皮细胞在体外具有血管生成能力.结论 组织块贴壁法培养小鼠心肌微血管内皮细胞操作简单,易于掌握,并且细胞获得率大,纯度高,为微血管病变的研究提供了实验模型.