ASM 真核表达载体的构建与鉴定

目的：构建含有酸性鞘磷脂酶（Acid sphingomyelinase ，ASM ）融合基因片段的质粒，并在真核细胞中表达、鉴定。方法：由人淋巴结cDNA 文库中扩增基因片段，将ASM 基因插入真核表达载体pEGFP-N1中，获得融合基因构建真核表达载体ASM-pEGFP-N1。以其瞬时转染He-la细胞，应用免疫印迹与流式细胞术检测融合蛋白与绿色荧光蛋白的表达。结果：正确获得A S M融合基因，DNA序列分析表明所构建的含ASM 融合基因的质粒与设计相同，融合蛋白与绿色荧光蛋白均正确表达。结论：成功构建了含有ASM 融合基因的真核表达载体，并在真核细胞中正确表达，为进一步研究肿瘤与ASM 表达之间的关系奠定了基础。