微RNA-29b在心肌缺血再灌注损伤中的作用及机制研究

目的 探讨微RNA-29b(miR-29b)在心肌缺血/再灌注(Ischemia/Reperfusion,I/R)损伤过程中是否发挥保护作用并探讨其可能的调控机制.方法 通过100μmol/L叔丁基过氧化氢(TBHP)诱导H9C2心肌细胞损伤构建I/R细胞模型;分别设立正常对照组,TBHP处理组,NC miRNA处理组,miR-29b类似物(mimic)处理组.通过实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(qPCR)检测各组心肌细胞内miR-29b表达量;人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK-8)检测各组心肌细胞的存活率;蛋白质印迹法(West-ern Blot)检测心肌细胞中凋亡蛋白和蛋白激酶B(Akt)蛋白磷酸化水平的改变.另一方面,将30只C57/B6小鼠(6～7周龄)逐个编号,通过随机数字表法抽样,随机分为三组,设立I/R组、NC miRNA处理组和miR-29b激动剂(agomir)处理组,其中miR-29b agomir组小鼠预先给予miR-29b agomir治疗.结扎冠状动脉左前降支30 min,然后再灌注4 h建立心肌缺血再灌注动物模型.通过埃文斯蓝(Evans)和2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)双重染色评估三组小鼠心肌梗死面积;qPCR检测各组小鼠心肌组织内miR-29b表达量;蛋白质印迹法检测心肌组织内凋亡蛋白改变.结果 细胞层面:与TBHP处理组相比(65±3)％,上调miR-29b表达可增加心肌细胞的存活率(85±3)％,下调心肌细胞凋亡蛋白表达(0.86±0.07).进一步的蛋白质印迹法实验结果表明:与TBHP处理组(0.81±0.05)相比,上调miR-29b能够抑制Akt蛋白磷酸化(0.41±0.02).动物层面:miR-29b agomir处理组小鼠心肌梗死面积(24±3)％与I/R组(62±2)％相比明显减少,且心肌组织凋亡蛋白表达明显减少(0.32±0.04).结论 上调miR-29b表达可以减少缺血再灌注损伤引起的心肌细胞凋亡.miR-29b可能是通过调控靶基因Akt磷酸化水平,下调心肌细胞凋亡水平,从而保护心脏.