合成基因IL-6在大肠杆菌中表达及融合蛋白鉴定分析
Guizhou Medical Journal（2020）
Abstract
目的 合成IL-6的编码基因,并在大肠杆菌中表达,获得纯化的融合蛋白IL-6.方法 采用基于PAS(PCR-based accurate synthesis)的方法,设计全长拼接引物,合成基因IL-6,并将其插入载体pCzn1,获得的重组质粒pCzn1-IL-6,化学法将其转化入大肠杆菌TOP10进行克隆.将克隆得到的阳性克隆子转化入大肠杆菌Arctic Express后用IPTG诱导剂诱导融合蛋白的表达,SDS-PAGE和Western Blot鉴定蛋白表达效果.结果 经测序和双酶切验证,正确构建了重组质粒pCzn1-IL-6,重组质粒成功转入表达菌株,IL-6原核蛋白在表达菌株中以包涵体和可溶性形式稳定表达,通过Ni柱亲和纯化获得纯化的目标蛋白.结论 IL-6原核蛋白在大肠杆菌中成功表达,为进一步的应用研究打下基础.
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