肝癌细胞HepG2外泌体对其自身甲基化的影响及其机制探究

目的 晚期肝癌患者预后很差,迄今为止尚无有效的治疗方法.文章观察肝癌细胞HepG2外泌体对自身甲基化水平的影响,并尝试探讨其机制. 方法 研究设置实验组和对照组,待细胞在10％血清的DMEM培养皿中长至60％进行换液,对照组胞用无血清的DMEM培养基培养,实验组为无血清的DMEM加入100μL(0.5 mg/mL)外泌体,孵育48 h后留取上清液.HepG2细胞培养并用超速差速离心法提取其外泌体,用粒径分析、透射电镜、Western blot等方法对其进行鉴定.通过划痕实验分析肝癌细胞HepG2细胞外泌体对细胞增殖能力的影响;荧光抗体染色观察其对自身甲基化水平的变化;荧光定量PCR检测甲基转移酶相关基因DNMT3A、DNMT3B、DNMT1和凋亡相关基因Bax、BcI-2等mRNA表达量的水平变化. 结果 倒置荧光显微镜下可见红色荧光的外泌体进入了细胞内,围绕于蓝色荧光的细胞核周围或核上,表明DiI进入了细胞膜或细胞质内.实验组6、12 h面积占比[(57.25±2.06、83.92±3.17)％]较对照组[(28.32±1.22、40.03±1.74)％]明显增加(P<0.05).实验组Bax、DNMT3A、DNMT3B基因表达高于对照组(P<0.05);而BcI-2表达低于对照组(P<0.05). 结论 肝癌细胞HepG2自身外泌体可以通过改变DNMT3A、DNMT3B等基因的转录表达量来增强DNA甲基化水平从而影响凋亡相关基因Bax、BcI-2类基因的表达,进而促进肝癌细胞HepG2增殖生长能力.