miR-7低表达导致非小细胞肺癌细胞吉非替尼耐药的作用机制

目的 非小细胞肺癌(NSCLC)患者吉非替尼耐药的机制仍然是目前研究的热点.文中旨在探讨吉非替尼获得性耐药肺癌细胞与非耐药细胞相比,MicroRNA(miRNA)的表达差异及调控MicroRNA表达后细胞的生长特性.方法 以NSCLC细胞A549、H1299为研究对象,构建吉非替尼耐药细胞,应用CCK-8法检测吉非替尼对细胞活性的影响,实时荧光定量PCR检测耐药、非耐药细胞中MicroRNA的表达量,微阵列检测细胞内MicroRNA表达谱,转染质粒上调mir-7的表达,Western blot检测细胞内表皮生长因子受体(EGFR)蛋白表达.结果 吉非替尼耐药A549、H1299细胞的IC50值是非耐药细胞的3倍.与A549、H1299非耐药细胞比较,其耐药细胞生长较为缓慢.MiRNA阵列分析中检测到43种miRNA的表达谱发生了显著变化,其中有25种上调的miRNA和18种下调的miRNA,miR-7在耐药细胞中显著下调.qPCR定量检测结果 表明mir-21、mir-124c、mir-181明显上调,mir-7、mir-146a、mir-145-p明显下调,其中mir-7变化最显著(P<0.05).与未转染细胞mir-7表达量(0.84±0.10)比较,转染过表达mir-7的质粒后细胞(6.72±0.84)升高(P<0.05).Western blot检测结果 显示,miR-7表达升高后,细胞内EGFR表达明显降低.H1299耐药细胞IC50由7.23 μg/mL降低至2.46 μg/mL,A549耐药细胞IC50由6.85 μg/mL降低至2.23 μg/mL(P<0.05).结论 miR-7的表达能负向调控EGFR的表达,miR-7的下调是导致NSCLC细胞吉非替尼耐药的机制之一.