不同离心方法提取及鉴定精浆外泌体的效果比较

目的 超速离心法、ExoPerfectTM-MU法和PEG6000法比较提取精浆外泌体的应用报道较少.文中旨在比较及鉴定超速离心法,ExoPerfectTM-MU法及PEG6000法提取的精浆外泌体,为外泌体的研究提供不同的选择方法.方法收集2017年3月至7月南方医科大学南方医院检验中心30例正常志愿者的精浆样本.随机平均分成3份,分别采用超速离心法,ExoPerfectTM-MU法及PEG6000法获取提取物,随后采用纳米颗粒跟踪分析仪分析其大小,透射电子显微镜观察其形态,蛋白印迹法检测其典型标志蛋白质.结果 超速离心法提取的精浆外泌体中CD63、TSG101含量[(3.29±0.22)、(0.84±0.03)]最多,其次分别是ExoPerfectTM-MU法[(3.25±0.17)、(0.75±0.02)]、PEG6000法[(2.62±0.06)、(0.54±0.10)],差异有统计学意义(P＜0.05).纳米颗粒跟踪分析仪结果提示MODE曲线线性流畅,精浆外泌体直径大小较为集中,粒径峰值平均值分别为105、102、115 nm,差异无统计学意义(P＞0.05).PEG6000法提取精浆外泌体的浓度、电镜下数量[(11.90±1.78)×108/mL、(4.7±1.7)个]较超速离心法[(21.20±0.98)×108/mL、(7.0±1.6)个],ExoPerfectTM-MU法[(19.74±1.45)×108/mL、(6.0±1.63)个]均明显降低(P＜0.01);ExoPerfectTM-MU法离心时间[(30±5)min]较超速离心法 、PEG6000法[(140±20)、(120±10)min]明显缩短(P＜0.001).结论 超速离心法、ExoPerfectTM-MU法、PEG6000法均能成功提取及鉴定精浆外泌体.超速离心法、ExoPerfectTM-MU法外泌体产量较多,ExoPerfectTM-MU法简捷方便.根据不同试验的实际需要,选择合适高效的外泌体提取方法尤为重要.