焦磷酸测序检测载脂蛋白E基因多态性方法的建立
Journal of Medical Postgraduates（2019）
Abstract
目的 载脂蛋白E主要参与脂类代谢和胆固醇转运,对维持身体健康有重要意义.建立载脂蛋白E基因112T>C和158C>T单核苷酸多态性的焦磷酸测序方法 .方法选择T、L、TT 3种扩增体系分别用60℃退火程序和62-68℃梯度升温退火程序,进行PCR体系和温度的优化考察.将焦磷酸测序结果 与Sanger测序结果比较,考察方法的特异性,通过梯度稀释人基因组核酸作为检测模板,考察方法的灵敏度.结果根据产物浓度和特异性确定60℃循环程序和L体系为最优条件.20份标本的焦磷酸测序结果与Sanger测序完全一致.灵敏度可达0.16 ng基因组DNA.结论 建立了ApoE基因中112和158位点的焦测序检测方法,可用于临床个体化用药指导.
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