抗MetFab-DOX对人肝癌细胞的多柔比星耐药作用

目的 抗MetFab-DOX能抑制肝细胞肝癌HepG2的增殖,而关于抗MetFab-DOX对多柔比星(DOX)耐药肝癌细胞的作用研究较少.文章构建DOX耐药细胞HepG2/DOX并探讨抗MetFab-DOX对该细胞耐药性的影响.方法 使用大剂量间歇诱导法构建DOX耐药肝癌细胞模型HepG2/DOX;细胞分为对照组(不加药物)、DOX组(5μg/mL)、抗MetFab-DOX组(含有DOX浓度5μg/mL),采用CCK8法、流式细胞凋亡检测、细胞免疫荧光、划痕愈合实验以及Transwell侵袭实验检测抗MetFab-DOX对HepG2/DOX增殖、凋亡、药物内化以及生物学功能的影响;构建HepG2/DOX荷瘤裸鼠模型并检测抗MetFab-DOX处理后对肿瘤体积和形态的影响.结果 耐药细胞株HepG2/DOX细胞对DOX以及抗MetFab-DOX的敏感性均明显降低,HepG2细胞与HepG2/DOX细胞的IC50差异均有统计学意义(P<0.05).不同药物处理24 h后,抗MetFab-DOX组细胞凋亡率高于DOX组(19.87％vs 8.09％,P<0.05);当药物作用48 h时,抗MetFab-DOX组细胞凋亡率亦高于DOX组(41.27％vs 16.15％,P<0.01).抗MetFab-DOX组以及DOX组在30 min细胞内化情况没有明显的差异,而在60 min以及120 min时抗Met-Fab-DOX组DOX荧光强度高于DOX组.抗MetFab-DOX组24 h细胞划痕愈合率(14.46％)低于DOX组(16.80％)和空白对照组(19.88％),差异有统计学意义(P<0.05).不同药物处理48 h后,与空白对照组细胞划痕愈合率(56.43％)和DOX组(36.96％)相比,抗MetFab-DOX处理后显著下降(22.60％),差异有统计学意义(P<0.01).与对照组单个视野平均穿膜细胞数(1043.52个)比较,DOX组(880.51个)和抗MetFab-DOX组(646.18个)明显减少(P<0.05),且抗MetFab-DOX组明显低于DOX组(P<0.05).药物处理第40天时,抗MetFab-DOX组抑瘤率明显高于DOX组(64.00％vs 35.27％,P<0.05).对照组中移植瘤组织细胞排列不规则,增殖期肿瘤大小不一,数目占比大.DOX组与对照组相比,细胞增生略有下降.在抗MetFab-DOX组中,肿瘤细胞进一步出现明显的皱缩变小,肿瘤细胞数量减少.结论 抗MetFab-DOX能有效降低肝细胞肝癌对DOX的耐药性,其机制可能与抗MetFab-DOX能够增加药物细胞中的积聚,诱导细胞凋亡相关.