靶序列富集多重 PCR-液相芯片联合检测4种常见呼吸道病毒的初步应用

目的：呼吸道病毒是引起婴幼儿呼吸道感染的最主要病原体，为快速准确诊断其感染，文中建立一种基于液相芯片系统的4种常见呼吸道病毒快速分子检测方法，为有效防控其发生和流行提供有力手段。方法采集南京总医院儿科就诊的有急性呼吸道感染症状的患儿咽拭子标本120例及30例正常对照标本，分别纳入患儿组和对照组。针对A型流感病毒（ FluA ）、B型流感病毒（ FluB）、呼吸道合胞病毒A型（ RSVA）和B型（ RSVB）的保守区序列分别设计并合成了特异性引物、探针和通用引物，构建4种病原体阳性参比品，通过对扩增和杂交条件的优化，建立了靶序列富集多重PCR （ Tem-PCR）和Luminex液相芯片（ xMAP）技术相结合的检测系统，并对该检测系统进行了特异性、灵敏度评价。收集以急性上呼吸道感染为主要表现的患儿咽拭子标本，用上述建立的方法进行检测分析，分别与单病毒基因荧光定量PCR检测方法及xTAG液相芯片法进行比对检测。结果建立了FluA、FluB、RSVA和RSVB4种呼吸道病毒的特异性快速分子检测方法且灵敏度可达10拷贝／μL。用快速分子检测方法和单病毒基因荧光定量PCR法对120例疑似患儿咽拭子标本进行检测，快速法阳性检出率为31．7％（38／120），荧光定量法阳性检出率为29．2％（35／120）。经一致性检验分析提示2种方法一致性较强（k＞0．7）。部分标本同时采用xTAG液相芯片试剂盒进行检测，经一致性检验分析提示2种方法一致性较好（k＞0．6）。结论临床的初步应用证实了4种常见呼吸道病毒快速分子检测方法具备灵敏、特异、快速等优点，为临床早期、准确判断呼吸道感染的病原体提供实验依据。