Tre 酶真核表达载体构建及其特异性识别 loxLTR序列的功能鉴定

目的：清除人类免疫缺陷病毒（ human immunodeficiency virus ， HIV）前病毒是治愈艾滋病的关键。构建Tre酶真核表达载体，鉴定其特异性识别HIV前病毒中所含有的loxLTR序列功能。方法经基因合成、PCR、酶切、连接等基因重组技术将Tre基因插入pcDNA3．1真核表达载体中，将EGFPpA-LoxLTR序列插入pmCherry-N1载体中，并经酶切、PCR、测序鉴定；用电穿孔法将构建的载体转染到HeLa细胞，用荧光显微镜观察荧光强弱及变化。结果经PCR、酶切、电泳、测序分析鉴定，Tre酶真核表达载体构建正确，转染HeLa细胞后，能特异性识别并剪切loxLTR序列。结论构建的Tre酶真核表达载体可在HeLa细胞中表达，并特异性识别loxLTR序列。