超声微泡介导沉默T淋巴细胞Itch基因对胃癌MFC细胞免疫杀伤作用的实验硏究

目的 利用超声介导微泡破裂技术(UTMD)沉默T淋巴细胞Itch基因表达,观察转染T细胞对胃癌MFC细胞的免疫杀伤效率.方法 免疫磁珠分离T淋巴细胞,构建靶向Itch基因的shRNA表达质粒,超声微泡介导转染48 h后,流式细胞仪分析T细胞转染成功率,Western blot测定T细胞Itch蛋白表达.转染24 h后,流式细胞仪检测T淋巴细胞活化早期标志CD69表达.转染72 h后,观察对比单纯T淋巴细胞、阴性对照T淋巴细胞及转染T淋巴细胞与小鼠胃癌MFC细胞共培养时肿瘤杀伤率.结果 利用UTMD技术介导shRNA转染效率达到51.9％, Itch蛋白表达能被有效抑制.转染24h后,转染组T淋巴细胞早期活化标志CD69表达较其他组更高.转染72 h后,与阴性对照组和空白组相比,在不同的效靶比水平(10: 1、 20: 1、40: 1), 转染T淋巴细胞杀瘤活性均增强.结论 利用UTMD技术介导shRNA转染能有效沉默 Itch基因表达,促进T淋巴细胞免疫活性,增强T淋巴细胞对胃癌MFC细胞的免疫杀伤效率.