缺氧对乳鼠耳蜗螺旋神经节神经元外向电流的影响及其环磷酸腺苷、环磷酸鸟苷含量变化的研究

目的 观察缺氧时间对体外培养的耳蜗螺旋神经节神经元(SGNs)外向电流的影响及其细胞内第二信使环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)含量变化.方法 体外原代培养新生1～3d SD大鼠SGNs并进行免疫荧光鉴定.用膜片钳全细胞记录模式观察缺氧外液灌流SGNs时,外向电流的变化趋势和特点.用酶联免疫吸附实验检测缺氧5、15和20 min时SGNs内cAMP和cGMP的浓度变化.结果 ①酶解分离可获得生存状态良好的神经元,经免疫荧光鉴定为SGNs.②当电压钳制在-60 mV时,急性缺氧增强SGNs外向电流,主要增强0～+60 mV电压区间的激活电流幅度.缺氧5min时,+60 mV激活电流幅度从(971.2±50.3)pA增强到(2361.0±207.4)pA,差异有统计学意义(P＜0.01).随后出现下降趋势,11 ～15 min时,增强的电流幅度与对照组基础电流比较,差异无统计学意义(P＞0.05).③分别检测缺氧5、15和20 min后SGNs中cAMP和cGMP的含量变化.缺氧5 min组与正常对照组比较,cAMP浓度升高,差异有统计学意义(P＜0.01).缺氧15 min组与正常对照组比较,cAMP浓度变化差异无统计学意义;缺氧20 min组与正常组对照组比较,cAMP浓度水平下降(P＜0.01).cGMP浓度随着缺氧时间的延长,总体呈下降趋势,但在20 min后有部分回升(缺氧15 min vs缺氧20 min,P＜0.01).结论 在SGNs急性缺氧损伤过程中,外向电流增强,增强幅度随缺氧时间变化先升后降,推测在短期缺氧时细胞通过降低兴奋性,影响听觉信息的传导,且该过程与胞内第二信使cAMP和cGMP浓度的改变相关.