不同浓度维替泊芬对鼻咽癌细胞株CNE1增殖、侵袭、凋亡的影响及其机制

目的 观察不同浓度维替泊芬对鼻咽癌细胞株CNE1增殖、侵袭、凋亡、细胞周期的影响,并探讨及其机制.方法 取对数生长期CNE1细胞分为实验组和对照组,实验组分别加入1、2、4μmol/L的维替泊芬,记为A、B、C组,对照组加入等量培养基.采用CCK-8法测算各组细胞存活率(以细胞存活率表示细胞增殖能力),采用细胞克隆形成实验测算细胞克隆形成个数(以细胞克隆形成个数表示细胞克隆形成能力),采用Transwell小室侵袭实验测算侵袭细胞数(以侵袭细胞数表示细胞侵袭能力),采用流式细胞术测算各组细胞凋亡率及各细胞周期细胞百分比,采用实时荧光定量PCR法检测B组及对照组细胞中YAP1、TEAD、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、B细胞瘤-2(Bcl-2)、细胞周期素D1(CyclinD1)、髓细胞组织增生蛋白(MYC)、Axl mRNA,采用Western Blotting法检测B组及对照组细胞中YAP1、TEAD、caspase-3、Bcl-2、CyclinD1、MYC、Axl蛋白.结果 A、B、C及对照组细胞培养24 h时细胞存活率分别为85.27％ ±0.63％、74.18％ ±1.01％、57.67％ ±0.92％、100.00％ ±0.42％,组间相比,P均<0.05;A、B、C及对照组细胞培养48 h时细胞存活率分别为70.35％ ±0.61％、59.33％ ±1.27％、41.39％ ±0.46％、100.00％ ±0.85％,组间相比,P均<0.05;A、B、C组细胞在培养48 h时的细胞存活率,与24 h时相比,P均<0.05.A、B、C及对照组细胞克隆形成个数分别为183.67±12.92、118.67±10.50、47.33±5.31、253.67±8.18个,组间相比,P均<0.05.A、B、C及对照组细胞侵袭细胞数分别为44.67±2.87、28.67±4.11、16.67±3.68、56.67±5.31个,组间相比,P均<0.05.A、B、C及对照组细胞凋亡率分别为14.52％ ±1.03％、26.56％ ±2.10％、38.64％ ±1.42％、5.31％ ±0.77％,组间相比,P均<0.05.A组G2/M、S、G0/G1期细胞分别为15.46％ ±1.74％、42.37％ ±2.69％、42.17％ ±1.73％,B组G2/M、S、G0/G1期细胞分别为8.39％ ±0.77％、34.48％ ±0.57％、57.13％ ±0.39％,C组G2/M、S、G0/G1期细胞分别为3.82％ ±1.89％、26.16％ ±0.81％、70.02％ ±1.42％,对照组G2/M、S、G0/G1期细胞分别为21.52％ ±0.75％、53.14％ ±1.31％、25.34％ ±0.95％,各细胞周期比例组间相比,P均<0.05.B组细胞中YAP1、TEAD、caspase-3、Bcl-2、CyclinD1、MYC、Axl mRNA的相对表达量分别为0.37±0.12、0.56±0.17、0.35±0.25、0.43±0.29、0.48±0.27、0.39±0.35、0.35±0.71,对照组细胞中YAP1、TEAD、caspase-3、Bcl-2、CyclinD1、MYC、Axl mRNA的相对表达量分别为1.00±0.33、1.00±0.67、1.00±0.14、1.00±0.28、1.00±0.81、1.00±0.33、1.00±0.11,两组相比,P均<0.05.B组细胞中YAP1、TEAD、caspase-3、Bcl-2、Cy-clinD1、MYC、Axl蛋白的相对表达量分别为0.51±0.45、0.44±0.31、0.42±0.23、0.61±0.09、0.39±0.41、0.52±0.38、0.48±0.21,对照组细胞中YAP1、TEAD、caspase-3、Bcl-2、CyclinD1、MYC、Axl蛋白的相对表达量分别为1.00±0.56、1.00±0.82、1.00±0.73、1.00±0.32、1.00±0.34、1.00±0.14、1.00±0.29,两组相比,P均<0.05.结论 1、2、4μmol/L的维替泊芬均可抑制CNE1细胞的增殖、侵袭能力,诱导细胞凋亡,阻滞生长周期,呈浓度依赖性,其作用机制可能与抑制YAP1及其下游因子的表达有关.