KDM2B过表达慢病毒载体构建及其在人卵巢癌细胞中的表达

目的 构建赖氨酸特异性脱甲基酶2B(KDM2B)过表达慢病毒载体,并探讨其是否能在人卵巢癌细胞A2780及SKOV3中稳定表达.方法 根据Gen-Bank数据库提供的KDM2B基因序列,用限制性内切酶获得线性化载体,制备目的基因片段并用GV慢病毒载体改造和包装病毒,对阳性克隆重组产物进行测序及鉴定.用LV-KDM2B过表达慢病毒感染A2780、SKOV3细胞(LV-KDM2B感染组),同时感染LV-CON作为阴性对照(LV-CON感染组),未感染的A2780、SKOV3细胞作为空白对照组.采用RT-PCR和Western blotting法分别检测细胞中KDM2B mRNA及蛋白表达.结果 慢病毒阳性克隆载体测序结果与目标序列完全一致.LV-KDM2B感染组A2780、SKOV3细胞中KDM2B mRNA及蛋白表达均较LV-CON感染组、空白对照组高,比较差异均有统计学意义(P均＜0.05).结论 KDM2B过表达慢病毒载体构建成功,且其可在人卵巢癌细胞A2780、SKOV3中稳定表达.