不同浓度乙酰胆碱对骨骼肌干细胞增殖、分化的影响

目的 探讨不同浓度乙酰胆碱对骨骼肌干细胞增殖和分化的影响及可能的机制.方法 培养小鼠骨骼肌干细胞C2C12细胞.①采用实时定量PCR法及Western blotting法检测C2C12细胞毒蕈碱样乙酰胆碱受体M1～M5亚型表达情况.②将C2C12细胞分为对照组、乙酰胆碱1组、乙酰胆碱2组、乙酰胆碱3组、乙酰胆碱4组,分别加入乙酰胆碱0、10-8、10-7、10-6、10-5 mol/L,分别培养24、48、72 h后,采用CCK8法检测细胞增殖情况,采用实时定量PCR法检测细胞增殖标志基因Pax7 mRNA表达.③取用诱导分化1d后的C2C12细胞,分为对照2组、乙酰胆碱5组、乙酰胆碱6组、乙酰胆碱7组、乙酰胆碱8组,分别加入乙酰胆碱0、10-8、10-7、10-6、10-5 mol/L,培养5d,采用光学显微镜观察法观察各组肌管的形成情况,采用实时定量PCR法检测细胞分化相关基因生肌调节因子(MyoD)、肌细胞生成蛋白(MyoG)、生肌调节因子(MYf5) mRNA表达.结果 ①M2受体mRNA及蛋白表达均为最高,M3受体mRNA及蛋白表达均为最低(P均＜0.05).②与对照组比较,乙酰胆碱1～4组各时点细胞增殖及Pax7 mRNA表达差异均无统计学意义(P均＞0.05).③光镜下发现,与对照2组相比,乙酰胆碱5组C2C12细胞分化明显,且肌管数目略有增多;乙酰胆碱6～8组C2C12细胞分化被抑制,以乙酰胆碱8组分化为成熟肌管数目减少最明显.乙酰胆碱5、6组MyoG mRNA表达均高于对照2组(P均＜0.05).乙酰胆碱7、8组MyoG、MyoD、Myf5 mRNA表达均低于对照2组,且乙酰胆碱8组MyoG、MyoD、Myf5 mRNA表达均低于乙酰胆碱7组(P均＜0.05).结论 高浓度乙酰胆碱可抑制C2C12细胞分化及其肌管形成,其机制可能与抑制分化相关基因MyoG、MyoD、Myf5的表达有关.