转录因子增强子结合蛋白-4基因沉默对子宫内膜癌细胞凋亡的影响
wf(2017)
摘要
目的:观察内源性转录因子增强子结合蛋白-4(AP-4)沉默对子宫内膜癌细胞凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法将人子宫内膜癌细胞(HEC-1-A 和 RL95-2)分为 NC 组、si#1组、si#2组,si#1组转染 si-TFAP4片段1,si#2组转染 si-TFAP4片段2,NC 组转染对照 siRNA。采用 Hoechest 33258染色观察凋亡核形态,采用 Annexin V-FITC /PI 染色流式细胞术测算细胞凋亡率,采用 real-time PCR 技术检测存活素(Survivin)mRNA 表达,采用生物信息学分析预测 Survivin 编码基因 BIRC5的启动子区域内是否存在 AP-4的结合位点,采用染色体免疫共沉淀技术验证 AP-4是否结合到 BIRC5的启动子区域,采用双荧光素酶报告系统检测 BIRC5的启动子转录激活情况。结果在 HEC-1-A、RL95-2细胞中,与 NC 组相比,si#1组、si#2组凋亡核型细胞数均增加,细胞凋亡率均增加,Survivin mRNA 相对表达量均减少(P 均<0.05)。BIRC5的启动子区域内存在一个高置信度的 AP-4结合位点,沉默 HEC-1-A、RL95-2细胞内源性 AP-4后能降低 AP-4对 BIRC5启动子区域的结合并抑制其转录激活状态。结论沉默内源性 AP-4能诱导子宫内膜癌细胞凋亡,其机制可能为降低了 AP-4对 Survivin 的转录激活,从而诱导了肿瘤细胞的凋亡。
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