人 Tudor-SN UTR 片段荧光素酶报告基因表达质粒的构建及活性检测

目的：为深入研究Tudor-SN蛋白本身在翻译水平的调控机制奠定基础。方法以HeLa细胞全基因组DNA为模板，PCR扩增出目的基因，利用双酶切的方法将目的片段连接到pGL3-Control载体上。再将构建成功的pGL3-5′UTR、pGL3-3′UTR重组质粒分别与内参海肾荧光素酶质粒瞬时共转染HeLa细胞，培养48 h检测荧光素酶的活性。结果双酶切和基因测序法鉴定重组质粒构建成功，转染重组质粒后可检测到荧光素酶的活性；以pGL3-5′UTR质粒荧光素酶活性最高。结论成功构建了人Tudor-SN基因5′UTR和3′UTR序列的重组质粒，为研究Tu-dor-SN基因UTR区对翻译调控的影响奠定了基础。