帕金森病细胞模型的构建及氨基酸表达观察

目的 建立帕金森病(PD)人神经母细胞瘤细胞模型,并筛选PD细胞中的氨基酸标志物.方法 将人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y分为正常组、溶媒组、鱼藤酮组.鱼藤酮组分别加入0.15、0.25 μmol/L的鱼藤酮,溶媒组加入二甲基亚砜(DMSO),正常组不加药物.分别于给药24、48 h后采用MTT法测算细胞存活率,倒置显微镜观察细胞形态,选择对细胞存活、形态影响较小的鱼藤酮作用浓度及作用时间(0.15 μmol/L、24 h),采用Western blotting法检测SH-SY5Y细胞中的α-突触核蛋白以验证PD模型.采用高效液相色谱法检测PD细胞中的谷氨酸(Glu)、丝氨酸(Ser)、谷氨酰胺(Gln)、组氨酸(His)、甘氨酸(Gly)、丙氨酸(Ala)、脯氨酸(Pro)、色氨酸(Trp)、苯丙氨酸(Phe)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、赖氨酸(Lys),对鱼藤酮组和溶媒组差异有统计学意义的氨基酸进入偏最小二乘判别分析,选择P<0.05且变量重要性投影值(VIP)>1的氨基酸为PD的标志物.结果 鱼藤酮组细胞中α-突触核蛋白相对表达量高于溶媒组(P均<0.05),表明SH-SY5Y细胞PD模型制作成功.给药24 h时,鱼藤酮组细胞中Glu、Ser、Gln、His、Gly、Pro、Phe、Ile、Leu、Lys水平低于溶媒组(P均<0.05);给药48 h时,鱼藤酮组除Gln外,其余11种氨基酸水平均低于溶媒组(P均<0.05).筛选氨基酸标志物为Glu、Ser、Gly、Pro(给药24 h时VIP值分别为1.016、1.016、1.016、1.009,给药48 h时VIP值均为1.001).结论 利用鱼藤酮诱导成功建立了PD细胞模型,筛选出Glu、Ser、Gly、Pro可能为PD的潜在标志物.