酵母双杂交技术筛选宫颈癌 HeLa 细胞cDNA 文库中 FAM92 A1-289关联蛋白

目的：应用酵母双杂交技术从宫颈癌HeLa细胞cDNA文库中筛选FAM92A1-289关联蛋白。方法构建酵母双杂交pGBKT7-FAM92A1-289诱饵载体，转化至酵母AH109感受态细胞中。利用Clontech GAL4酵母双杂交系统筛选HeLa细胞cDNA文库中与FAM92A1-289相互作用的蛋白质，用营养缺陷型培养基和X-a-Gal双重筛选实验进行筛选，对筛选结果进行生物信息学分析，对克隆重复率较高的蛋白进行回转验证，将β-半乳糖苷酶活性阳性的克隆进行测序并分析。结果成功构建酵母双杂交pGBKT7-FAM92A1-289诱饵载体，可在酵母细胞中正常表达FAM92A1-289，且对酵母细胞无毒性，不存在自激活现象。筛选出在SD／-Ade／-His／-Leu／-Trp四缺培养基及含X-a-Gal的SD／-Ade／-His／-Leu／-Trp四缺培养基上均能生长且β-半乳糖苷酶活性阳性的克隆9个。经生物信息学分析发现4种蛋白重复率较高，即增殖细胞核抗原（PCNA）、半乳糖凝集素1（Galectin-1）、内质网高尔基体中间室标记物53（ERGIC-53）、重组人BCL2相关永生基因1（BAG1），并均与FAM92A1-289存在相互作用。结论利用酵母双杂交技术在Hela细胞cDNA文库中成功筛选出与FAM92A1-289相互作用的蛋白，为进一步研究FAM92A1-289的功能提供了新线索。