肝癌干细胞体外富集模式的构建

目的 构建肝癌干细胞体外富集模式.方法 选择肝母细胞瘤HepG2细胞系,以有限稀释法培养体外单细胞,观察体外单细胞克隆培养的克隆细胞生长曲线和形成全克隆、部分克隆以及旁克隆的比例,选取全克隆逐级扩增,取1×104和1×106的HepG2细胞进行裸鼠皮下成瘤实验,qRT-PCR检测全克隆癌干细胞表面标志物ABCG2、ALDH1A3、CD44、CXCR4、OCT4 mRNA,悬浮球形成实验计算全克隆悬浮球形成率.对全克隆细胞加0.5、0.3、0.2、0.1、0.05、0.01 μg/mL浓度的阿霉素干预48 h,观察全克隆生长情况;对于干预后存活的全克隆全部进行逐级扩增和裸鼠荷瘤实验.结果 HepG2细胞克隆形成率为32.78％±9.03％,其中全克隆、部分克隆、旁克隆百分比分别为7.12％±2.96％、62.67％±13.39％、30.21％±14.87％;所有全克隆均可逐级扩增;1×104、1 ×106个HepG2细胞全克隆接种裸鼠成瘤率分别为12.5％、100％;与HepG2细胞相比,单细胞全克隆ABCG2、CD44、ALDH1A3、CXCR4和OCT4表达倍数分别为2.26±0.33、2.67±0.55、3.96±1.56、2.56±0.55、1.05±0.40,两者ABCG2、ALDH1A3、CD44、CXCR4相比,P均＜0.05;只有HepG2全克隆细胞可形成悬浮球.单细胞克隆培养后的全克隆进行阿霉素干预,发现仅加入0.1、0.05、0.01 μg/mL阿霉素的HepG2细胞全克隆存活,接种裸鼠成瘤率均为100％.结论 成功构建了肝癌干细胞体外富集模式.