结直肠癌患者外周血 LAP ＋CD4＋调节性T 细胞的分离纯化及功能鉴定

目的：应用免疫磁珠分选法分离纯化结直肠癌患者外周血中 LAP ＋CD4＋调节性 T 细胞（LAP ＋CD4＋T），并对分选获得的目的细胞进行体外功能的初步研究。方法按照免疫磁珠两步法（阴性分选和阳性分选）分离结直肠癌患者外周血单个核细胞中的 LAP ＋CD4＋T 细胞，流式细胞术（FACS）检测分选后细胞的纯度；台盼蓝染色检测细胞存活率；CCK-8掺入法检测其对 LAP －CD4＋T 细胞的增殖抑制效应；ELISA 法检测体外细胞因子 TGF-β和IL-10表达。结果经免疫磁珠法分选获得的 LAP ＋CD4＋T 细胞纯度为（95．16±2．11）％，台盼蓝染色细胞存活率为（93．64±1．33）％。CCK-8掺入法检测结果显示 LAP ＋CD4＋T 细胞干预后 LAP －CD4＋T 细胞生长明显受到抑制（P ＝0．000）；ELISA 结果显示 LAP ＋CD4＋T 细胞较 LAP －CD4＋T 细胞分泌更高浓度的细胞抑制因子 TGF-β和 IL-10（P ＝0．000）。结论免疫磁珠法分选结直肠患者外周血中 LAP ＋CD4＋T 细胞具有高效、快捷、纯度高等优点，且不损伤细胞活性。